掌握要點(diǎn)合理使用計數(shù)板

　　計數(shù)板被用以對人體內(nèi)紅、白血球進(jìn)行顯微計數(shù)之用，也常用于計算一些細(xì)菌、真菌、酵母等微生物的數(shù)量，是一種常見的生物學(xué)工具。
 
　　計數(shù)板的使用方法：
 
　　1.視待測菌懸液濃度，加無菌水適當(dāng)稀釋(斜面一般稀釋100倍)，以每小格的菌數(shù)可數(shù)為度。
 
　　2.取潔凈的血球計數(shù)板一塊，在計數(shù)區(qū)上蓋上一塊蓋玻片。
 
　　3.將菌懸液搖勻，用滴管吸取少許，從計數(shù)板中間平臺兩側(cè)的溝槽內(nèi)沿蓋玻片的下邊緣滴入一小滴(不宜過多)，讓菌懸液利用液體的表面張力充滿計數(shù)區(qū)，勿使氣泡產(chǎn)生，并用吸水紙吸去溝槽中流出的多余菌懸液。也可以將菌懸液直接滴加在計數(shù)區(qū)上(不要使計數(shù)區(qū)兩邊平臺沾上菌懸液，以免加蓋蓋玻片后，造成計數(shù)區(qū)深度的升高)，然后加蓋蓋玻片(勿使產(chǎn)生氣泡)。
 
　　4.靜置片刻，使細(xì)胞沉降到計數(shù)板上，不再隨液體漂移。將血球計數(shù)板放置于顯微鏡的載物臺上夾穩(wěn)，先在低倍鏡下找到計數(shù)區(qū)后，再轉(zhuǎn)換高倍鏡觀察并計數(shù)。由于生活細(xì)胞的折光率和水的折光率相近，觀察時應(yīng)減弱光照的強(qiáng)度。
 
　　5.計數(shù)時若計數(shù)區(qū)是由16個中方格組成，按對角線方位，數(shù)左上、左下、右上、右下的4個中方格(即100小格)的菌數(shù)。如果是25個中方格組成的計數(shù)區(qū)，除數(shù)上述四個中方格外，還需數(shù)中央1個中方格的
 
　　菌數(shù)(即80個小格)。為了保證計數(shù)的準(zhǔn)確性，避免重復(fù)計數(shù)和漏記，在計數(shù)時，對沉降在格線上的細(xì)胞的統(tǒng)計應(yīng)有統(tǒng)一的規(guī)定。如菌體位于大方格的雙線上，計數(shù)時則數(shù)上線不數(shù)下線，數(shù)左線不數(shù)右線，以減少誤差。即位于本格上線和左線上的細(xì)胞計入本格，本格的下線和右線上的細(xì)胞按規(guī)定計入相應(yīng)的格中。見右圖:即本格中計數(shù)細(xì)胞為3個。
 
　　6.對于出芽的酵母菌，芽體達(dá)到母細(xì)胞大小一半時，即可作為兩個菌體計算。每個樣品重復(fù)計數(shù)2-3次(每次數(shù)值不應(yīng)相差過大，否則應(yīng)重新操作)，按公式計算出每mL(g)菌懸液所含細(xì)胞數(shù)量。
 
　　7.測數(shù)完畢，取下蓋玻片，用水將血球計數(shù)板沖洗干凈，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免損壞網(wǎng)格刻度。洗凈后自行晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干，放入盒內(nèi)保存。